【摘要】 目的：探讨异常凝血酶原（protein induced by vitamin K absence or antagonist-Ⅱ，PIVKA-Ⅱ）与高尔基体蛋白（Golgi glycoprotein，GP73）联合检测对诊断血清甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）低浓度的原发性肝癌（primary hepatic carcinoma，PHC）的临床价值。方法：选取本院2015年3月-2016年12月AFP低浓度PHC72例，其他肝病68例，同期体检正常对照组110例，分别检测PIVKA-Ⅱ（ELISA）和GP73（ELISA）、AFP（化学发光法）的血清浓度水平。结果：PIVKA-Ⅱ与GP73联合检测在AFP低浓度PHC的系列试验特异度高达100%，联合试验敏感度达90.2%。结论：单独检测PIVKA-Ⅱ和GP73对AFP低浓度肝癌具有较高的诊断价值，PIVKA-Ⅱ与GP73联合检测可提高AFP低浓度肝癌诊断。
【关键词】 肝癌； PIVKA-II； GP73； AFP
【Abstract】 Objective：To combined detection of PIVKA-Ⅱ and GP73 for the diagnosis of low concentration of AFP PHC clinical value.Method：72 cases of low concentration of AFP PHC，and other liver diseases of 58 cases were selected in our hospital from May 2015 to December 2016，110 cases of normal control group in the same physical examination，they were detected in PIVKA-Ⅱ（ELISA）and GP73 （ELISA），AFP（chemiluminescence）concentration level.Result：Combined detection of PIVKA-Ⅱ and GP73 had high diagnostic efficacy at low AFP concentration in PHC，and the specificity of the test was as high as 100%.Joint test sensitivity was 90.2%.Conclusion：The independent detection of PIVKA-Ⅱ and GP73 is high diagnostic value for low AFP PHC，and the combined detection of PIVKA-II and GP73 can improve the diagnostic value of low AFP PHC.
【Key words】 Liver cancer； PIVKA-Ⅱ； GP73； AFP
First-author’s address：The People’s Hospital of Gaozhou，Gaozhou 525200，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.04.028
原发性肝癌（primary hepatic carcinoma，PHC）是现今我国第4位的常见恶性肿瘤，严重威胁我国人民的生命和健康[1-2]。对肝癌高危人群的筛查，有助于早期发现、早期诊断、早期治疗，是提高肝癌疗效的关键。临床上把早期的诊疗作为延长PHC患者生存期和改善生活质量的重要策略。血清甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）是目前大多数医院最常用的PHC肿瘤标志物，但灵敏度和特异性都不能满足临床需要，约30%的肝癌患者AFP水平正常[3]。人异常凝血酶原（protein induced by vitamin K absence or antagonist-II，PIVKA-Ⅱ）是肝脏合成的异常脱羧基凝血酶原，最近研究表示它能通过诱导和刺激肝癌细胞的增殖和侵袭。多项研究数据表明高尔基体蛋白（Golgi glycoprotein，GP73）在肝癌患者中有高浓度的表达，具有较高的特异性。本研究拟通过对PIVKA-Ⅱ与GP73浓度水平回顾性的分析，以提高在AFP低浓度的PHC实验室诊断水平，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取本院2015年3月-2016年12月的肝病患者140例，纳入标准：严格按照《原发性肝癌诊疗规范》（2017年版）进行筛选。排除标准：其他恶性肿瘤患者；严重感染或肾功不全患者；代谢性疾病患者；孕妇或哺乳期患者。其中AFP低浓度PHC组72例，PHC組病例选择经过病理组织切片或细胞学确诊；非肝癌的其他肝病组经影像或病理组织学确诊68例。本研究已获伦理学委员会批准和患者知情同意。选取同期体检健康者110例为健康对照组。
1.2 方法 所有待检者均要求在清晨空腹状态下抽静脉血3～5 mL，血液在室温下自然凝固后，3 500 r/min分离血清，-75 ℃保存待测。PIVKA-Ⅱ、AFP使用雅培ARCHTECT-I2000进行检测，使用相应的配套试剂。采用ELISA方法进行测定GP73的浓度，试剂购于中山金桥生物制品公司。以上所有检测均严格按照相应的说明书进行操作。
1.3 观察指标与评价标准 观察各组PIVKA-Ⅱ、GP73的阳性率、特异性及敏感度。联合检测包括系列试验（串联试验）和平行试验（并联试验），采用多种方法检测时，系列实验是指必须几个指标均为阳性才能诊断为阳性。平行试验是几个指标中有一个阳性即诊断为阳性。
1.4 统计学处理 使用SPSS 17.0统计软件进行分析，计量资料采用（x±s）表示，比较采用t检验，计量资料采用率（%）表示，比较采用 字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 三组患者一般资料比较 三组患者的年龄、性别比较差异均无统计学意义（P>0.05）。见表1。
2.2 各组PIVKA-Ⅱ和GP73阳性情况比较 PIVKA-Ⅱ和GP73在AFP低浓度PHC组、其他肝病组和健康对照组两两比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。其他肝病组和健康对照组中PIVKA-Ⅱ和GP73阳性情况比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。见表2。
2.3 PIVKA-Ⅱ、GP73单项或联合检测的诊断效能分析 对于AFP低浓度PHC诊断效能分析，PIVKA-Ⅱ的敏感度（76.5%）和特异性（95.2%）均高于GP73的敏感度（72.2%）和特异性（94.6%）。在72例AFP低浓度PHC患者中，系列实验的特异度（100%）、准确度（87.6%）高于平行实验，但敏感度（57.1%）低于平行实验（90.2%）。见表3。
3 讨论
PHC为我国常见的消化系统肿瘤，具有恶性程度高、病情进展快，致死率较高的特点。我国每年因肝癌死亡的人数占全球的一半。肝癌症中晚期一般会伴有肝内外的转移，手术切除术效果较差。目前PHC的诊断主要依靠影像检查和病理活检切片检查，对早期的筛查诊断造成了一定的困难。因此，疾病早期的筛查和及早地诊断在临床治疗PHC上显得尤为必须和重要。
血清肿瘤标志物对检测PHC有重要的意义。文献[4]研究发现，在PHC的早期筛查中，肿瘤标志物检测比影像学或组织病理学提前4～6个月，目前临床上检测AFP是诊断PHC的常用方法。AFP起源于胚胎肝细胞，在肝细胞发生癌变后部分肝癌细胞会恢复产生这种蛋白的能力[5]。但AFP用于原发性肝癌的诊断也存在一些局限性，对于检测瘤体小的肝癌和早期肝癌，阴性率较高[6-8]。有资料指出包括肝内胆管癌、高分化和低分化的PHC或已液化坏死的PHC患者，AFP浓度水平均发生不增高的情况，对于AFP低浓度或阴性的PHC患者容易造成漏诊[9-11]，因此寻求新的标志物，对疾病的早期诊断和治疗有着重大的临床意义。
PIVKA-Ⅱ由肝脏合成，但没有相应的凝血酶活性，是一种特异性较强和敏感度较高的肿瘤标志物[12-14]。对于肝癌组织中产生PIVKA-Ⅱ的机制有多种说法，其中比较流行的包括在肝癌细胞中γ-羧基凝血酶原转录后表达异常和过多的凝血酶原前体产生、维生素K代谢异常后导致Vit-K可用性下降等一系列机制，从而导致在肝癌组织中过表达等。研究表明，肝癌细胞转种动物肝脏实验能产生大量PIVKA-Ⅱ并分泌到肝细胞外，而且浓度水平和种植时间成正相关[15-16]。本试验72例AFP低浓度的PHC患者中的PIVKA-Ⅱ的阳性率远高于其他肝病组和健康对照组，比较差异均有统计学意义（P<0.05），PIVKA-Ⅱ在其他肝病组的阳性率也高于健康对照组（P<0.05）。GP73是肝细胞中的一组高尔基体Ⅱ型跨膜糖蛋白，在正常生理情况下位于体内细胞的高尔基顺面膜囊上，血清浓度极低，但在病理状况下可游离出肝细胞的表面分泌到血液中[17-18]。国内外的研究发现PHC患者中的GP73可有较高的表达，而且具有较好的组织特异性和敏感性[18-21]。本试验结果为AFP低浓度PHC患者中的GP73阳性率高于其他肝病组和健康对照组，比较差异均具有统计学意义（P<0.05）。表明了GP73对诊断AFP低浓度的PHC患者具有较高的阳性率，这与文献[22-23]研究结果一致。在临床上可以通过检测GP73从而互补了AFP低浓度的PHC的临床检测。
本研究通过单独检测AFP低浓度的PHC患者中PIVKA-Ⅱ或GP73，发现前者的敏感度、特异度均高于后者，表明PIVKA-Ⅱ在AFP低浓度的PHC的诊断中有较好的价值，但目前暂未检索与此相應的研究数据或文献报道。在两个病例组的联合实验发现，PIVKA-Ⅱ和GP73的系列试验特异度和准确度均高于平行实验，其系列试验特异度高达100%。平行实验的敏感度也相应地提高到90.2%。单项的PIVKA-Ⅱ或GP73都有其自身的诊断价值的同时也存在相应的局限性。通过PIVKA-Ⅱ和GP73的联合检测可进一步提高AFP低浓度的PHC的敏感性和特异性，增高疾病的检出率，为诊治提供更好依据。
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（收稿日期：2017-10-27） （本文编辑：周亚杰）
