HPVE6/E7mRNA检测在宫颈疾病中的临床应用探讨

报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

以2014年1-7月在笔者所在医院因宫颈炎症、阴道异常流血及排液、阴道分泌物增多而就诊的210例患者为研究对象，均为已婚或有多年性生活史，年龄20～65岁，平均年龄为38岁。

1.2 方法

1.2.1 标本的采集 将专用的宫颈刷伸入子宫颈外口，轻压并依顺时针方向旋转3～4周，取得宫颈口脱落细胞。迅速将采样刷留在标本储存瓶中，盖好盖子，作好标记立即送检。-20 ℃冰箱保存。检测前取出室温放置30 min。标本一部分用于HPV DNA检测，另一部分用于HPV E6/E7 mRNA检测。

1.2.2 HPV DNA检测 采用港龙生物技术（深圳）有限公司生产的试剂盒和美国BIO-RAD公司制造的CFX实时荧光定量PCR仪，操作方法严格按照产品说明书进行。

1.2.3 HPV E6/E7 mRNA检测 试剂和仪器均采用河南科蒂亚（新乡）生物技术有限公司生产的试剂盒和冷光仪。操作方法严格按照产品说明书进行。

1.2.4 TCT 将标本储存瓶内的标本经自动化系统处理，制成薄层细胞涂片，95%酒精固定，H-E染色，光镜检查。TCT细胞学分类法：未见上皮内病变/恶性细胞（NILM）、不典型鳞状上皮（ASC）、轻度鳞状上皮内病变（LSIL）和重度鳞状上皮内病变（HSIL）。

1.3 统计学处理

采用SPSS 17.0软件对所得数据进行统计分析，不同细胞学诊断级别间HPV癌基因E6/E7 mRNA水平比较采用均数±标准差（x±s）表示，比较采用t检验；不同方法的阳性率比较以率（%）表示，比较采用字2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA检测符合情况

210例患者标本HPV DNA总体阳性率为55.23%，HPV E6/E7 mRNA阳性率为38.09%。经字2检验，HPV DNA检测技术阳性率明显高于HPV E6/E7 mRNA，差异有统计学意义（字2=30.85，P<0.001）。

HPV E6/E7 mRNA的灵敏性和特异性分别为52.8%（56/106）、76.9%（80/104），HPV DNA的敏感性和特异性分别为73.6%（78/106）、63.5%（66/104）。HPV E6/E7 mRNA的诊断敏感性低于HPV DNA，但特异性高于HPV DNA。详见表1。

2.2 同细胞学诊断级别间HPV DNA与HPV E6/E7 mRNA的阳性率比较

细胞学病变组的HPV E6/E7 mRNA和HPV DNA的阳性率均比细胞学正常组增高，差异有统计学意义（其中HPV E6/E7 mRNA：字2=19.71，P<0.001；HPV DNA：字2=29.14，P<0.001）；病变组内各组HPV E6/E7 mRNA的阳性率不全相等，差异有统计学意义（字2=12.93，P<0.05），但各组的HPV DNA的阳性率差异均无统计学意义（P>0.05），详见表2。

2.3 受检标本HPV E6/E7 mRNA的表达情况比较

细胞学病变组各个级别所对应的HPV癌基因E6/E7 mRNA水平均显著高于细胞学阴性组，差异均有统计学意义（P<0.05）。病变组内随细胞学病变程度加重，HPV癌基因E6/E7 mRNA表达呈增高趋势，但差异无统计学意义（P>0.05），详见表3。

3 讨论

HPV感染是子宫颈癌的主要病因，HPV DNA检测是子宫颈癌高危人群和癌前病变筛查的有效手段。然而，HPV DNA能反映HPV的存在与否，却不能揭示其病毒的致癌活性，因为大多数妇女的HPV感染是一过性的，只有高危HPV亚型的持续感染才会发展成宫颈癌，所以病毒的致癌活性的检测有其重要的临床价值[3]。有研究发现宫颈癌发生的分子机制是HPV癌基因E6和E7片段的表达失控，导致E6和E7癌基因蛋白的持续性高表达，进而向宫颈高度病变进展[4]。由于E6和E7蛋白过度表达是宫颈癌危险性增加的一种标记，那么，通过监测病毒癌基因E6/E7的表达，可以达到预测宫颈病变进展的目的。

文献[5-6]报道，对宫颈病变患者进行2年随访，发现HPV mRNA较DNA具有更高特异性及阳性预测值，更有利于鉴别短暂的宫颈异常及可能进一步发展的病变。研究发现，HPV E6/E7 mRNA检测在敏感性方面低于HPV DNA检测，但在特异性方面却比HPV DNA检测高。分析原因可能是HPV感染比较普遍，大部分感染者可通过自身免疫力自行清除，只有少部分感染者会持续感染，HPV癌基因发生整合，具有进一步恶变的风险。为提高宫颈高度病变的筛检效能，两个指标联合使用可能会更有价值。对HPV DNA检测阳性的患者进行HPV E6/E7 mRNA检测，可以在一定程度上降低患者的心理负担[7]。

王华等[8]研究发现，HPV E6/E7 mRNA表达随宫颈病变级别升高呈趋势性增加，不同宫颈病变级别HPV E6/E7 mRNA拷贝值差异均有统计学意义（P<0.05）。但由于本研究样本量较少，宫颈病变组各级别间HPV癌基因E6/E7 mRNA水平差异无统计学意义（P>0.05），故在以后的研究中尚需扩大样本量进一步深入研究。

总之，HPV E6/E7 mRNA表达与宫颈病变关系密切，其高表达很可能促进宫颈癌前病变的发生发展[9-10]。HPV E6/E7 mRNA检测在一定程度上能反映病毒的致癌能力，在分流HPV感染或细胞学阳性患者方面，应具有非常好的临床应用前景，可与HPV DNA检测互为补充，为妇科医师提供更完善的诊疗依据及临床疗效评估。

参考文献

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[8]王华，陈亚宝，叶丽华，等.应用支链DNA技术检测人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA在宫颈疾病筛查中的价值[J].中华临床医师杂志（电子版），2011，5（15）：4362-4366.

[9]刘桐宇，谢榕，郑雄伟，等.TCT标本检测高危HPV E6/E7mRNA及在宫颈病变中的应用研究[J].中华妇幼临床医学杂志（电子版），2011，7（3）：202-205.

[10]康一青，欧阳新华，何丹，等.宫颈细胞DNA超早期筛查宫颈病变的临床分析[J].中国医学创新，2013，10（9）：134-135.

（收稿日期：2014-09-27） （编辑：金燕）

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