【摘要】 目的 检测血管内皮生长因子C（VEGF-C）在食管正常上皮、食管上皮非典型增生及食管鳞状细胞癌（鳞癌）组织中的表达， 探讨VEGF-C与食管鳞癌发生、淋巴结转移和发展的相互联系。方法 采用免疫组织化学S-P法检测25例正常食管、70例食管鳞状上皮非典型增生、55例食管鳞癌组织中VEGF-C的表达。结果 VEGF-C在正常食管鳞状上皮、食管鳞状上皮非典型增生及食管鳞癌组织中的表达依次增高， 差异有统计学意义（P<0.05）， 无淋巴结转移的食管癌组织中VEGF-C的阳性表达明显低于有淋巴结转移病例（P<0.05）， VEGF-C在低分化鳞癌组织中的表达明显高于中高分化鳞癌组织（P<0.05）， 但与临床分期无关。结论 VEGF-C蛋白表达与食管鳞癌发生、发展及淋巴转移有关。
【关键词】 食管癌；血管内皮生长因子C；免疫组织化学；肿瘤发生发展；转移
食管癌是我国许多地区， 特别是华北地区最常见的恶性肿瘤之一， 发病率随年龄的增长不断升高， 肿瘤细胞的扩散和转移是肿瘤致死的主要原因， 新生淋巴管和血管的生成是肿瘤转移的依靠， 淋巴管生成受VEGF-C的影响[1]， 在肿瘤淋巴结转移中起非常重要的作用。本文应用免疫组化S-P法检测VEGF-C在食管正常上皮、食管上皮非典型增生及食管鳞状细胞癌组织中的表达情况， 目的在于探讨其在食管癌发生、转移和发展中的重要意义， 现报告如下。
1 资料与方法
1. 1 一般资料 选取本院病理科2012年3月～2014年3月手术切除标本150例， 患者年龄41～82岁， 平均年龄56.8岁。术前均没有放疗和化疗， 其中食管正常上皮25例， 食管上皮非典型增生70例（轻度非典型增生18例， 中度非典型增生24例， 重度非典型增生28例）， 食管鳞状细胞癌组织55例， 临床Ⅰ期食管鳞癌病例13例， 临床Ⅱ期30例， 临床Ⅲ期9例， 临床Ⅳ期3例；组织病理分级：6例高分化， 15例中分化， 34例低分化， 30例无淋巴结转移， 25例有淋巴结转移。
1. 2 试剂 兔抗人VEGF-C多克隆抗体、DAB显色剂、S-P试剂盒均购于武汉博士德生物工程有限公司。
1. 3 方法 免疫组化步骤 ：肿瘤组织标本经10%中性福尔马林固定， 常规石蜡包埋， 切片厚度为3 μm， 脱蜡、水洗， 滴加一抗、二抗， DAB显色， 苏木素复染， 中性树胶封片， 以已知抗体阳性组织作为阳性对照， 用PBS替代一抗作阴性对照。
1. 4 判定标准 VEGF-C蛋白在癌细胞胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性， 细胞核着色无意义， 低倍镜下（×100）分别选取VEGF-C密度最高癌细胞阳性区域， 计数10个视野中的500个癌细胞， 以细胞阳性数占肿瘤细胞数的百分率来表示， 阳性细胞数≥10%为阳性[2]。
1. 5 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件对数据进行统计分析。计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验；相关性采用线性相关分析。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2 结果
2. 1 VEGF-C在食管正常上皮、食管上皮非典型增生及食管鳞状细胞癌组织中的表达 VEGF-C阳性标记是棕色颗粒定位于食管癌细胞或食管非典型增生细胞的胞浆中， 阳性对照有明显的阳性标记， 阴性对照没有阳性标记。
2. 2 VEGF-C与食管鳞状细胞癌发生、进展的联系 随着食管病变的进展（正常-非典型增生-癌）， VEGF-C的阳性表达率显著增高， 食管正常鳞状上皮表达呈阴性， 食管鳞状上皮轻-中度非典型增生阳性率为2.4%（1/42）， 食管鳞状上皮重度非典型增生阳性率为32.1%（9/28）， 鳞癌组织阳性率为45.5%（25/55）， 差异有统计学意义（P<0.05）。
2. 3 VEGF-C阳性表达与食管鳞状细胞癌淋巴结转移的联系 无淋巴结转移组VEGF-C阳性表达率33.3%（10/30）明显低于有淋巴结转移组60.0%（15/25）， 差异有统计学意义（P<0.05）。
2. 4 VEGF-C表达与食管鳞状细胞癌分期及分级的联系 高分化鳞癌6例中阳性反应1例， 中分化鳞癌15例中阳性反应4例， 低分化鳞癌34例中阳性反应20例。VEGF-C表达与食管癌的分级呈负相关（P<0.05）， VEGF-C在不同分期的食管鳞癌患者中表达（阳性表达：Ⅰ期6例， Ⅱ期14例， Ⅲ期4例， Ⅳ期1例）差异无统计学意义（P>0.05）， 表明VEGF-C的表达与临床分期无关。
3 讨论
1996年Joukov等[3]克隆并分离出VEGF-C， Skobe等[4]研究发现它可以使肿瘤内部和肿瘤周围组织有新的淋巴管形成， 且可以增加淋巴转移能力， 本文采用免疫组化S-P法分别检测了食管正常上皮、食管上皮非典型增生和食管鳞癌中的表达， 发现食管正常上皮及食管上皮非典型增生阳性表达率明显低于食管鳞癌组织， 表达程度随肿瘤的恶性程度增加而增高， 表明它在食管鳞癌发展过程中起关键作用， 实验发现VEGF-C表达与食管鳞癌分期无关， 与分化程度呈负相关， 中高分化组中阳性表达率明显低于低分化组， 表明其有癌分化抑制的作用， 且表达与淋巴转移紧密联系， 有淋巴结转移组阳性表达明显高于无淋巴结转移组。本实验中无淋巴结转移组中有10例表达阳性， 淋巴结转移和组织分化程度是食管鳞癌患者的两个重要预后因素， 为食管癌患者预后的重要生物学指标， 抑制肿瘤生长最有效的治疗是抑制血管的生成， 但恶性肿瘤主要是通过淋巴管扩散， 本试验在食管鳞癌组织标本中基因表达增强， 可通过阻滞其表达， 从而使淋巴管的生成受到抑制并且促进癌细胞凋亡， 从而抑制癌细胞的局部浸润及淋巴结转移， 对其通路抑制可为食管鳞癌的治疗提供新途径。
参考文献
[1]Niki T， Iba S， Tokunou M， et al. Expression of vascular endothelial growth factorA， B， C and D and their relationships to lymph node status in lung adenocarcinoma. Clin Cancer Res， 2000， 6（6）：2431-2439.
[2]Tang RF， Itakura I， Aikawa T， et al. Over expression of lymp-hangiogenic growth factor VEGF-C in human pancreatic cancer. Pancreas， 2001， 22（3）：258-292.
[3]Joukov V， Pajusola K， Kaipainen A， et al. A novelvascularendothelial growth factor， VEGF-C， is a ligand for the Flt4（VEGFR-3） and KDR （VEGFR-2） receptor tyrosine kinases. EMBO J， 1996， 15（2）： 290-298.
[4]Skobe M， Hawighorst T， Jackson DG， et al. Induction of tumor limp angiogenesis by VEGF-C promotes breast cancermetastasis. Nat Med， 2001， 7（2）：192-198.
[收稿日期：2015-06-01]
