【摘 要】目的：研究慢性非细菌性前列腺炎（CNP）大鼠模型不同时段血清中TNF-α、IL-1ß、IL-2和IL-10变化。方法：成年雄性SD大鼠，随机分成对照组、45d组、60d组和90d组。建立模型，ELISA法测定血清中TNF-α、IL-1ß、IL-2和IL-10含量，光镜观察其形态学变化。结果：1.模型组表现为CNP病理学变化。2. 45d、60d和90d大鼠与对照组比较，差异有统计学意义，45d、60d和90d大鼠TNF-α、IL-1ß、IL-2和IL-10含量高于对照组（P<0.05）；90d大鼠与45d、60d组比较，差异有统计学意义，90d大鼠高于45d、60d组 （P<0.05）。结论：CNP大鼠前列腺TNF-α、IL-1ß、IL-2和IL-10含量增多，且随着造模时间延长炎症愈严重。
【关键词】慢性非细菌性前列腺炎；血清；细胞因子
临床上慢性非细菌性前列腺炎（chronic nonbacterial prostatitis，CNP）症状很复杂，但诊治及发生机制仍是医学难题。本研究通过建立CNP大鼠模型，研究不同造模时段血清中TNF-α、IL-1ß、IL-2和IL-10含量变化，探讨其发生的可能机制。
1 材料与方法
1.1 动物
健康成年雄性SD大鼠70只，由天津放射医学研究所提供。
1.2 模型和分组
取大鼠30只，取前列腺组织，加入与前列腺等重的生理盐水，制成匀浆，离心取上清液，测其浓度，将前列腺蛋白液稀释为40g/L备用。40只大鼠，随机分为对照组，45d组，60d组，90d组，各10只。分别在第0d、30d，模型组腹腔注射0.5ml百白破疫苗（武汉生物制品研究所），同时皮内多点注射1ml的比例1：1的弗氏完全佐剂FCA（Sigma公司）和前列腺蛋白提取液的混悬液。对照组注射同体积生理盐水。
1.3 光镜观察
造模后第45d、60d、90d，取前列腺组织，固定24h，脱水透明浸泡，石蜡包埋后切片，HE染色，光学观察；
1.4 血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-2（IL-2）和白介素-10（IL-10）测量
ELISA法（武汉博士德有限公司）测定血清中TNF-α、IL-1β、IL-2和IL-10含量。
1.5 统计学分析
对资料进行描述性和差异性统计分析。符合正态分布，采用均数和标准差分别描述集中和离散趋势。方差齐同，采用完全随机设计的方差分析，并采用SNK-q法进行多组间两两比较。检验标准为α=0.05。统计软件：SAS9.1。
2 结果
2.1光鏡检查（图1）
对照组前列腺正常（A）；45d组毛细血管周围出现淋巴细胞浸润，腺腔不规则（B）；60d组间质水肿加重，毛细血管周围有大量淋巴细胞浸润，且有局部腺上皮向腔内突入，部分基膜增宽或被破坏，腔内分泌物增多或减少（C）；90d组间质可见大量淋巴细胞和肥大细胞以及少量中性粒细胞和浆细胞；上皮呈节段性坏死脱落，腺腔扩张，部分腔内未见分泌物，间质胶原纤维增生（D）。
2.2血清中TNF-α、IL-1ß、IL-2和IL-10水平（表1）
与对照组相比，各模型组血清中TNF-α、IL-1ß、IL-2和IL-10明显增加，差别有显著性（P<0.05）；与其他三组相比90d血清中TNF-α、IL-1ß、IL-2和IL-10增加，差别有显著性（P<0.05）。提示造模后大鼠前列腺组织出现炎症，且随着造模时间延长炎症愈严重。
3 讨论
CNP是最常见的慢性前列腺炎，占其发病率的90%以上[1]。临床上症状复杂繁多，病程迁延易发，对患者的生活质量和身心健康造成重大影响。但是由于其发生机制不明，至今没有彻底治疗的方法。目前有学者认为细胞免疫可能在CNP的发病机制中起重要作用[2]。胡丙成等研究认为CNP可能是一种过敏性炎症反应或自身免疫性疾病，一种以细胞因子为中介产生的连锁反应[3]。Bai等[4]学者发现CNP患者外周血FOXP3基因（对CD4+CD25high调控T淋巴细胞增殖和功能发挥具有重要作用）表达增加，这些都说明免疫反应与CNP的发生存在密切关系。
细胞因子是研究CNP炎症反应应答最重要的调节机制之一，分为三类：前炎症细胞因子、抗炎症细胞因子、调节性细胞因子。其中TNF-α和IL-1ß是前炎症细胞因子，TNF-α可激活前列腺内的中性粒细胞和单核巨噬细胞产生其他促炎症因子，从而加速前列腺炎症的进展。有学者发现慢性前列腺炎患者TNF-α的水平与白细胞计数存在相关性[5]。IL-1ß可以诱导黏附分子表达增加，从而使T淋巴细胞和单核细胞等从血管渗出进入前列腺组织，促进内皮细胞和巨噬细胞等合成IL-8，进一步活化白细胞，还可诱导环氧化酶2基因表达，一旦被触发，环氧化酶2快速增加，引发众多生物学效应，在CNP的发生发展中起重要作用。IL-2是调节性细胞因子，可以调控巨噬细胞和淋巴细胞等炎症细胞的增殖和分化，也能促进淋巴素活化杀伤细胞和自然杀伤细胞的增值和定向分化。 IL-10是人类免疫应答中已发现的最重要的抗炎症细胞因子，通过抑制IL-1和TNF的炎症效应发挥抗炎作用。有学者提出IL-10在具有临床症状的CNP炎症免疫反应中发挥关键性作用，检查IL-10水平可以间接了解前列腺局部炎症反应状况[6]。因此通过测量CNP大鼠前列腺组织TNF-α、IL-1ß、IL-2和IL-10的水平探讨其可能的作用机制。
本实验显示，用自身免疫反应所建立的CNP动物模型，其病理改变与临床的最接近，发病机理也较为符合，且不会引起其他器官的病理改变，仅导致前列腺组织的自身免疫反应，具有很好的特异性，是一种较为理想的造模方法。
與对照组相比，模型组血清中TNF-α、IL-1ß、IL-2和IL-10明显增加，且随着造模时间延长增加愈明显。CNP是一个病情发展缓慢且持久的极其复杂病理过程，本研究将动物模型时间分别延长为45d、60d、90d，旨在探讨在不同时段CNP大鼠血清中TNF-α、IL-1ß、IL-2和IL-10含量变化。不同时段模型血清中TNF-α、IL-1ß、IL-2和IL-10含量变化，提示CNP模型血清中TNF-α、IL-1ß、IL-2和IL-10含量变化是一个动态过程，更符合临床表现，更有临床意义。
综上所述，CNP存在血清中TNF-α、IL-1ß、IL-2和IL-10含量变化，且不同时段变化不同，与慢性前列腺炎发生密切相关，其具体机制有待进一步研究。
参考文献
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