摘要：在基础饲料中分别添加质量为0、0.005%、0.01%、0.02%、0.04%微生态制剂干粉，研究微生态制剂对锦鲤生长、肠道消化酶活性、表观消化率的影响。结果发现，不同浓度微生态制剂对锦鲤的生长均有促进作用，其中002%添加组的增质量率、特定生长率最高，较对照组分别显著增加62.29%、50.00%，但饲料系数显著降低1667%。在20、30、40 d时，各微生态制剂添加组的肠胰蛋白酶活性、干物质表观消化率较对照组均显著提高，其中20 d时Ⅳ组的胰蛋白酶活性、干物质表观消化率显著高于其他试验组。10、20、30、40 d时，各微生态制剂添加组的肠脂肪酶活性较对照组均有所提高，其中30、40 d时各添加组的肠脂肪酶活性显著增加。各微生态制剂添加量对试验鱼肠淀粉酶活性无显著性影响。说明饲料中添加微生态制剂能显著提高锦鲤生长性能，增强肠道消化酶活性，并在一定程度上提高锦鲤对饲料营养物质的利用率，适宜的添加量为0.02%，适宜持续投喂时间为20 d。
关键词：微生态制剂；锦鲤；生长性能；消化酶；表观消化率
中图分类号： S965.812文献标志码： A[HK]
文章编号：1002-1302（2017）13-0136-03[HS）][HT9.SS]
收稿日期：2015-12-28
基金项目：现代农业产业技术体系建设专项（编号：GSY20160201）；北京淡水鱼种质资源保存项目（编号：KJCX20140112）；北京市农林科学院观赏鱼与热水性名优鱼类创新团队项目（编号：BJRKYGSYTD2016）。
作者简介：史东杰（1985—），女，北京人，硕士，工程师，主要从事观赏鱼繁育及养殖技术研究。E-mail：sdj19850104@163.com。
[ZK）]
微生态制剂是从天然环境中筛选分离出来的多种有益微生物的复合物，富含蛋白质、脂肪及其他生理活性物质，具有无残留、无抗药性、无污染等优点，被广泛应用于水产动物养殖[1-3]。已有研究表明，微生态制剂可平衡或改善鱼类消化系统有益菌群、提高鱼类血清免疫力、促进生长发育，同时微生态制剂可有效分解养殖水环境中的氨氮、亚硝酸盐等有害物质，改善养殖环境，提高鱼类生长性能和抗病力[4-6]。近年来，有关微生态制剂应用于鱼类生长及消化酶活性的研究较多，是水产动物饲料添加剂的应用热点，但关于微生态制剂调节锦鲤生长、消化酶活性及表观消化率的研究尚少。本试验通过在锦鲤饲料中添加微生态制剂粉剂，研究其对锦鲤生长、肠道消化酶活性及表观消化率的影响，为锦鲤健康养殖提供技术参考。
1材料与方法
1.1试验材料
试验鱼来自北京市水产科学研究所小汤山良种繁育中心自行繁育的红白锦鲤。试验用基础饲料不含微生态制剂（表1），微生态制剂购自康源绿洲生物科技（北京）有限公司，含有枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、蛋白酶、玉米蛋白粉、藻类营养素、光合催化剂、活性酶、免疫因子剂及代谢产物等多种物质，有效活菌数≥2 000亿/g，按分组配比加入基础饲料的预混料中。
1.2试验设计及飼养管理
选取体质健壮、规格整齐的锦鲤225尾，初始体质量为（183.76±5.48） g，随机分配15个小型循环水养殖缸（1.5 m×1.5 m×1.5 m）内进行养殖，每缸15尾，实际养殖水容积为2.5～2.8 m3。试验分为5组，1个对照组（Ⅰ组）、4个试验组（Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组、Ⅴ组），每组设3个平行，Ⅰ组投喂基础饲料，其他试验组分别添加微生态制剂干粉质量为0005%（Ⅱ组）、0.01%（Ⅲ组）、0.02%（Ⅳ组）、0.04%（Ⅴ组）。试验鱼试养7 d后开始正式试验，分别投喂对应的试验饲料，试验周期为40 d。试验期和试养期饲养条件相同，养殖用水为地下井水，水温为（18±1） ℃，pH值为7.4，溶氧量≥5 mg/L，光照为自然光源。每日投喂2次（09：30、17：00），投喂量为鱼体质量的3%～3.5%，根据鱼体的摄食情况作适当调整。[JP]
1.3生长性能指标的测定
[JP2]养殖试验结束时，禁食24 h，测量每缸试验鱼体质量。选用增质量率、特定生长率、饲料系数、成活率作为主要生长性能指标。增质量率（WGR，%）=（终末体质量-初始体质量）/初始体质量×100%；特定生长率（SGR，%/d）=（ln终末鱼体质量-ln初始鱼体质量）/饲养时间（d）×100%；饲料系数（FCR）=总投喂量/（终末体质量+死鱼质量-初始体质量）；成活率（SR，%）=试验末鱼尾数/试验初鱼尾数×100%。[JP]
1.4消化酶活性的测定
在试验10、20、30、40 d时取样，每次取样前禁食24 h。每缸随机选取试验鱼6尾，在冰盘上迅速解剖，分离出整个肠道，双蒸水冲洗，迅速用液氮冷冻2 min，放入-80 ℃超低温冰箱保存，备测胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶等消化酶的活性。胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的测定采用北京澳联雅实验设备中心的试剂盒进行，具体测定方法参照试剂盒说明书。
[HTK]1.5表观消化率的测定[HT]
在试验后10、20、30、40 d取样，每次取样时，在1次投喂后3 h将试验鱼捞起，解剖取出肠道，挤出肠道后1/3的粪便，用清水洗去肠道黏液。试验连续重复多次，待收集到足够的粪便样品后于75 ℃下烘干至恒质量，备测干物质表观消化率。Cr2O3采用Frukawa等的酸消化比色法[7]测定。每个样品测定3个平行样。
干物质表观消化率（ADC，%）=100%-100%×饲料中的Cr2O3含量/粪便中的Cr2O3含量。
1.6数据统计与分析
试验数据用“平均值±标准差”表示。采用SPSS 13.0软件进行数据统计和分析，用多重比较法进行组间差异显著性分析，显著水平为0.05。
2结果与分析
2.1饲料中添加微生态制剂对锦鲤生长性能的影响
不同浓度微生态制剂对锦鲤的生长均有促进作用（表2）。与对照组Ⅰ相比，Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组的增质量率、特定生长率均显著增加，增质量率分别提高8.93%、37.02%、62.30%，特定生长率分别提高14.29%、28.57%、50.00%，但其饲料系数显著降低8.97%、8.97%、16.67%。试验组Ⅴ与对照组相比，增质量率提高7.06%，特定生长率提高429%，饲料系数降低1.28%，且均无显著性差异。不同添加组对成活率无显著影响。结果表明，饲料添加0.02%微生态制剂对锦鲤促生长效果最佳。
2.2饲料中添加微生态制剂对锦鲤消化酶活性的影响
与对照组相比，20、30、40 d时各微生态制剂添加组的肠胰蛋白酶活性均显著提高，且20 d时Ⅳ组的胰蛋白酶活性显著高于其他试验组（表3）。与对照组相比，10、20、30、40 d时各微生态制剂添加组的肠脂肪酶活性均有所提高，10、20 d时各添加组的肠脂肪酶活性增加不显著，30、40 d时各添加组的肠脂肪酶活性显著增加。与对照组相比，10、20、30、40 d时，各微生态制剂添加量对试验鱼肠淀粉酶活性均无显著性影响。说明微生态制剂的适量添加能够提高锦鲤肠道内胰蛋白酶活性、脂肪酶活性，但对淀粉酶活性无显著影响，适宜的添加量为0.02%，适宜持续投喂时间为20 d。
[HTK]2.3饲料中添加微生态制剂对锦鲤干物质表观消化率的影响[HT]
饲料中添加微生态制剂可以提高饲料中营养成分的表观消化率，并在一定程度上提高锦鲤对饲料营养物质的利用率（表4）。与对照组相比，20、30、40 d时各微生态制剂添加组的干物质表观消化率均显著提高，20 d时Ⅳ组的干物质表观消化率显著高于其他试验组，为98.46%±1.15%。说明以干物质表观消化率为指标，添加量为0.02%，持续投喂20 d时效果最好。
3讨论
大量研究表明，在水产动物饲料中添加微生态制剂可以促进供试动物的生长性能，提高饲料利用率[7-9]。如付鑫等对幼刺参[10]、仇明等对斑点叉尾[XCZ11.tif，JZ][11]、白利丹等对锦鲤[12]、艾炎军等对大鳞副泥鳅[13]、刘晓勇等对杂交鲟幼鱼[14]的研究均表明，适当添加微生态制剂可促进动物对营养物质的消化吸收，加强鱼体消化能力，调节代谢，改善生长性能。在本试验中，不同浓度微生态制剂对锦鲤的生长均有促进作用，其中0.02%添加组的增质量率、特定生长率最高，较对照组分别显著增加62.29%、50.00%，但饲料系数显著降低 16.67%。这表明本试验与上述研究一致，微生态制剂的添加均对水产动物产生了积极的作用。在本试验中，0.04%添加组对增质量率、特定生长率、饲料系数的影响与其他添加组较对照组相比有所下降，说明过量添加微生态制剂可能会有不利的影响。例如，丁丽等研究表明，增质量率和特定生长率随着酵母菌和乳酸菌添加量的增加呈现先降低后升高的趋势[15]，随着芽孢杆菌添加量的增加反而降低，这说明过多或过少的益生菌对动物都会有不利的影响。
在本试验中，20、30、40 d时各微生态制剂添加组的肠胰蛋白酶活性较对照组均显著提高，10、20、30、40 d时各微生态制剂添加组的肠脂肪酶活性均有所提高，说明微生态制剂通过作用于锦鲤肠道，提高了其胰蛋白酶、脂肪酶的活性，从而增强了锦鲤对饲料的利用率。但本试验还显示，20 d时002%添加组的胰蛋白酶活性才显著高于其他试验组，30、40 d 时各添加组的肠脂肪酶活性才显著增加。可能是由于胰蛋白酶、脂肪酶的中心生成器官是肝胰脏，这2种酶由肝胰脏分泌后再转移至肠道时需要一个生理过程。牟洪生等研究微生态制剂A对罗非鱼生长及消化酶活性的影响，结果显示由芽孢杆菌和光合细菌为主要成分组成的复合微生态制剂A能够提高罗非鱼的淀粉酶活性[16]。徐文彦等研究枯草芽孢杆菌对黄河鲤生产性能及消化酶活性的影响，结果显示枯草芽孢杆菌的添加对黄河鲤中肠组织淀粉酶活性无显著性影响[17]。在本试验中，與对照组相比10、20、30、40 d时各微生态制剂添加量对试验鱼的肠淀粉酶活性无显著性影响。可能与微生态制剂的种类、剂量、添加量、试验鱼品种、规格及肠道pH值差别、基础饲料等有关，这还有待对淀粉酶主要分泌器官肝胰脏中该酶的活性进行测定，可能会有一些新的结论。
研究发现，微生态制剂对动物肠道吸收功能有一定的促进作用[15，18]。在本试验中，20、30、40 d时各微生态制剂添加组的干物质表观消化率较对照组均显著提高，说明饲料中添加微生态制剂可以提高饲料中营养成分的表观消化率，并在一定程度上提高锦鲤对饲料营养物质的利用率。这与付鑫等对幼刺参[10]、仇明等对斑点叉尾鮰[11]、丁丽等对异育银鲫[15]的研究结论一致。刘克林等在研究益生菌对鲤鱼免疫功能影响时观察到，试验组肠道黏膜皱褶增多、隐窝增深、微绒毛长而密集，肠道吸收面积增加，同时益生菌降低了肠道内环境pH值，有利于刺激肠道消化腺的代谢分泌活动，从而提高肠道消化酶活力，继而提高了鱼类对营养物质的消化吸收能力[19]。在本试验中，虽未对各微生态制剂添加组的试验鱼肠道的表观及pH值进行详细研究，但通过测定干物质表观消化率也间接反映了本试验的研究结论与刘克林等的研究结论[19]相同，即微生态制剂增强了鱼类对饲料中营养成分的吸收，有关微生态制剂促进鱼类饲料营养物质吸收利用的作用机制还有待进一步研究。
4结论
综上所述，饲料中添加微生态制剂显著提高了锦鲤生长性能，增强了肠道消化酶活性，并在一定程度上提高了锦鲤对饲料营养物质的利用率，适宜的添加量为0.02%，适宜持续投喂时间为20 d。
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